एनजीएस आणि सेंगर सीक्जेन्सिंगमध्ये फरक. NGS vs Sanger Sequencing

Anonim

महत्वाची फरक - एनजीएस विरुद्ध सॅन्गर सीक्झेसिंगिंग पुढची पिढीची सीक्जेन्सिंग (एनजीएस) आणि सेंगर सीक्झेन्सिंग या दोन प्रकारचे न्युक्लिऑटाईड सिनेकिंगिंग टेक्नॉलॉजी वेळोवेळी विकसित झालेली आहे. Sanger Sequencing पद्धतीचा बर्याच वर्षांपासून मोठ्या प्रमाणावर वापर करण्यात आला आणि त्याच्या फायद्यांच्यामुळे नुकतेच NGS ने ते बदलले. एनजीएस आणि सॅन्जर सीक्वेन्सिंग यातील महत्वाचा फरक असा आहे की

एनजीएस एक क्रमवार प्रणालीद्वारे जलद गतीने लक्षावधी अनुक्रमांची अनुक्रमिकतेच्या तत्त्वावर कार्य करते, तर डेन्डिओक्सिनक्लियोटाइड्सचे निवडक निगमन झाल्यामुळे सायन समाप्तीचे प्रिन्सवर काम करते. डीएनए प्रतिकृती दरम्यान डीएनए पोलिमॅरेझ एंझाइम आणि केशिका इलेक्ट्रोफोरेसीस द्वारे खंड वेगळे करणे.

अनुक्रमणिका

1. विहंगावलोकन आणि महत्त्वाचे अंतर

2 Nucleotide अनुक्रमांक 3 काय आहे एनजीएस 4 काय आहे सॅन्गर सीक्झेन्सिंग 5 साइड तुलना करून साइड - एनजीएस वि सॅन्जेन्सिंग 6 सारांश न्यूक्लियोटाइड अनुक्रमांक काय आहे?

अनुवांशिक माहिती जीवसृष्टीच्या डीएनए किंवा आरएनएच्या न्यूक्लियोटाइड अनुक्रमांमधे साठवली जाते.

दिलेल्या तुकड्यात (जीन, जीन्सची क्लस्टर, गुणसूत्र आणि पूर्ण जीनोम) न्यूक्लियोटाइड (चार बेसांचा वापर) ची योग्य क्रम ठरविण्याची प्रक्रिया न्युक्लिओटाईड अनुक्रमांक म्हणून ओळखली जाते

. जीनोमिक संरचना, फॉरेन्सिक अभ्यास, विषाणू, जैविक पद्धतशीर, वैद्यकीय निदान, बायोटेक्नॉलॉजी आणि इतर अनेक क्षेत्रांमध्ये जीन्सच्या संरचनेत आणि कार्याचे विश्लेषण करणे हे फार महत्वाचे आहे. शास्त्रज्ञांद्वारे विकसित होणाऱ्या वेगवेगळ्या प्रकारच्या क्रमिक पद्धती आहेत. त्यापैकी, 1 9 77 मध्ये फ्रेडरिक सेंगरने विकसित केलेल्या सेंजर सिक्वन्सिंग

बर्याच काळाने

पुढील पिढीतील अनुक्रमांक याऐवजी वापरण्यात आले.

एनजीएस म्हणजे काय? नेक्स्ट जनरेशन सीक्जेन्सिंग (एनजीएस) हा एक शब्द आहे ज्याचा वापर आधुनिक हाय-थ्रुपुट क्रमवारत प्रक्रियांच्या संदर्भात केला जातो. हे जीनोमिक अभ्यास आणि आण्विक जीवशास्त्र मध्ये क्रांतिकारी बदललेल्या विविध आधुनिक क्रमवारीतील तंत्रांचे वर्णन करते. त्या तंत्रात इल्युमिना अनुक्रमणिका आहेत, रोश 454 अनुक्रमांक, आयन प्रोटॉन सिक्विंगिंग आणि सोलिड (ऑलिगो लिगेशन डिटेक्शनद्वारे क्रमिकरण) क्रमवारणी. NGS प्रणाली जलद आणि स्वस्त आहेत. एनजीएस प्रणालीमध्ये चार मुख्य डीएनए सिंकिंग पद्धती वापरल्या जातात; pyrosequencing, संश्लेषण द्वारे sequencing, ligation आणि आयन सेमिकांडक्टर क्रमवारत द्वारे sequencing. बहुसंख्य डीएनए किंवा आरएनए सींडे (लाखो) अनुक्रमे समांतर असू शकतात. थोड्या कालावधीमध्ये संपूर्ण जीनोम प्राण्यांच्या क्रमवारीत अनुक्रमित करण्याची परवानगी देते.

पारंपारिक क्रमवारीतील सेंगर पद्धतीपेक्षा एनजीएसकडे अनेक फायदे आहेत. ही एक उच्च गती, अधिक अचूक आणि कमी प्रभावी प्रक्रिया आहे जी लहान सॅम्पल आकाराने केली जाऊ शकते. एनजीएस मेटागेनोमिक अभ्यासामध्ये वापरला जाऊ शकतो, अंतर्भूत केल्यामुळे आणि हटविण्यामुळे एखाद्या स्वतंत्र जीनोममधील फरक ओळखून आणि जीनच्या अभ्यासाच्या विश्लेषणात. चित्रा_1: एनजीएस अनुक्रमणिकेत विकास सॅगर सीक्सेलिंगिंग म्हणजे काय? सॅन्गर सीक्जेन्सिंग हे 1 9 77 मध्ये फ्रेडरिक सेन्गर आणि त्यांच्या सहकार्यांनी दिलेल्या डीएनए खंडांचे अचूक न्युक्लिओटाईड ऑर्डर निर्धारित करण्यासाठी एक क्रमवार पद्धत आहे. त्याला चैन रिमांडिशन क्रमवारन किंवा

डीडीओसी अनुक्रमण [99 9] म्हणून देखील ओळखले जाते. डीएनए पोलिमेराझ डीडीटीपी, डीडीसीटीपी, डीडीएटीपी आणि डीडीटीटी डीएनएच्या प्रतिकृती दरम्यान चेन डिसमिसिंग डीडऑक्सीन्यूक्लियोटायडिस (डीडीएनएनटीपी) चे निवडक समावेश करून या पद्धतीचा कार्यक्षेत्र लटकलेला आहे. सामान्य न्यूक्लियोटाइडमध्ये 3 'OH गट आहेत ज्यामध्ये किनाऱ्यावरील न्युक्लिओटाईड्स दरम्यान फॉस्फोडिएस्टर बॉन्डच्या निर्मितीसाठी कांही बांधकाम पुढे चालू ठेवण्यात येते. तथापि, डीडीएनटीपीमध्ये या 3 'ओएच ग्रुपची कमतरता नाही आणि न्यूक्लियोटाइडमध्ये फॉस्फोडिस्टर बॉन्ड्स तयार करण्यास असमर्थ आहे. म्हणून, साखळी वाढण्याची वेळ थांबविली जाते.

या पद्धतीत, एकल-अडकलेल्या डीएनए चे क्रम अनुक्रमाने

इन विट्रो डीएनए संश्लेषणासाठी टेम्पलेट स्ट्रेंड म्हणून कार्य करते. इतर आवश्यकता म्हणजे ओलिगॉन्यूक्लॉटाइड प्राइमर, डीओक्सिनक्लियोक्लॉइड प्रीसर्सर्स आणि डीएनए पोलिमारेझ एंझाइम. जेव्हा लक्ष्यित तुकड्यांच्या पृष्ठभागाची सुरुवात होते, तेव्हा डीएनए प्रतिकृतीसाठी प्राइमर्स सहजपणे डिझाइन केले जाऊ शकतात. चार स्वतंत्र डीएनए संश्लेषण प्रतिक्रिया चार वेगवेगळ्या नळीमध्ये केल्या जातात. प्रत्येक नलिका वेगवेगळ्या डीडीएनटीपी आहेत, ज्यात इतर आवश्यकता आहेत. विशिष्ट न्यूक्लियोटाइडवरून, डीएनटीपी आणि डीडीएनएनटीपी यांचे मिश्रण जोडले जाते. त्याचप्रमाणे, चार मिश्रणात चार मिश्रणात चार मिश्रणात चार मिश्रणे दिली जातात. प्रतिक्रियांनंतर डीएनए तुकड्यांची तपासणी केली जाते आणि तुकड्यांच्या माहितीचे अनुक्रम माहिती बदलते. परिणामी डीएनए तुकड्यांना उष्णता विल्हेवाट व जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसने वेगळे केलेले आहे. जर अणुकिरणोत्सर्जी न्युक्लिओटिड्सचा उपयोग केला तर, polyacrylamide gel मध्ये ब्रांडींग पॅटर्न आटोराडियोोग्राफीद्वारे पाहिले जाऊ शकते. जेव्हा ही पद्धत फ्लोरोसेंटली टॅग्डिड डायडोओक्सिनक्लियोटाइड्स वापरते, तेव्हा ते फॅर्रोसेंट डिटेक्टरद्वारे शोधले जाण्यासाठी लेझरच्या बीममधून वाचता येणारे जेल खाली हलविले जाऊ शकते. अनुक्रम डोळ्यांनी वाचले जाते तेव्हा उद्भवू शकणारे त्रुटी टाळण्यासाठी आणि संगणकात स्वतःच प्रवेश करण्यासाठी, या पद्धतीने संगणकासह स्वयंचलित क्रमचक्र वापरुन विकसित केले गेले.

मानवी जीनोम प्रकल्पातून डीएनएला अनुक्रमित करण्याची ही पद्धत आहे. ही पद्धत अद्याप प्रगत सुधारांबरोबर वापरात आहे कारण ती एक महाग आणि मंद प्रक्रिया असूनही योग्य क्रम माहिती देते.

आकृती: सँगेर सीक्जेन्सिंग एनजीएस आणि सॅन्गरे सीक्झेन्सिंगमध्ये काय फरक आहे?

- अंतर लेख -> एनजीएस विरुद्ध सॅन्गर सीक्झिंग नेक्स्ट जनरेशन सिक्वेंसिंगिंग (एनजीएस) आधुनिक हाय-थ्रुपुट क्रमवारत प्रक्रियांचा संदर्भ देते.यात बर्याच आधुनिक सिकेंजिंग टेक्नॉलॉजीजचे वर्णन केले आहे

सॅगर सीक्जेन्सिंग ही डेन्मार्कची क्रमवार पद्धत असून फ्रेडरिक सेंगरने दिलेल्या विशिष्ट डीएनए फ्रॅगमेंटची न्युक्लिओटाईड ऑर्डर निश्चित केली आहे.

खर्च परिणामकारकता एनजीएस ही स्वस्त प्रक्रिया आहे कारण यामुळे वेळ, मनुष्यबळ आणि रसायने कमी होतात. ही एक महाग प्रक्रिया आहे कारण यात वेळ, मनुष्यबळ आणि अधिक रसायने लागतात. गती हे द्रुत आहे कारण समांतर रेषेचा शोध आणि सिग्नलचा शोध दोन्ही समांतर होत आहे. हे वेळ घेणारे असल्यामुळे रासायनिक तपासणी आणि सिग्नल ओळख दोन वेगळ्या प्रक्रिया म्हणून होते आणि फक्त एकावेळी एकाच वेळी वाचू शकते.

विश्वसनीयता> एनजीएस विश्वसनीय आहे. सॅन्गर सिकेंजिंग कमी विश्वसनीय आहे नमुना आकार

एनजीएसला कमी डीएनए आवश्यक आहे.

या पद्धतीसाठी मोठ्या प्रमाणात टेम्पलेट डीएनए आवश्यक आहे.

प्रत्येक विभागीय तुकड्यात डीएनए पायाभूत घटक

प्रत्येक अनुक्रमित तुकड्यावर डीएनए पायांची संख्या सेंन्जर पद्धतीपेक्षा कमी आहे

निर्मिती क्रम एनजीएस च्या अनुक्रमांपेक्षा लांब आहेत.

सारांश - NGS vs Sanger Sequencing एनजीएस आणि सेंगर सीक्जेन्सिंग न्यूक्लियोटाइड सिक्वेन्सिंग तंत्रज्ञानाचा व्यापक उपयोग आण्विक जीवशास्त्र मध्ये आहे. Sanger sequencing हे एनजीएस द्वारे पुनर्स्थित केलेल्या प्रारंभिक अनुक्रमण पद्धती आहे. NGS आणि Sanger Sequencing मधील मुख्य फरक हे आहे की एनजीएस एक उच्च गति, अधिक अचूक आणि कमी प्रभावी प्रक्रिया आहे जो सेंगर सिकेंजिंगपेक्षा जास्त आहे. दोन्ही तंत्रज्ञानातील जननशास्त्र आणि जैवतंत्रज्ञान मध्ये प्रमुख उद्रेक निर्माण. संदर्भ: 1 नोअर्सियन, मिनू "यूकेरियोटिक सूक्ष्मजीव साठी पुढील-निर्मिती क्रमवारीत तंत्र: जैविक समस्यांकरीता अनुक्रम-आधारित सोल्यूशन्स. "युकेरियोटिक सेल अमेरिकन सोसायटी फॉर मायक्रोबायोलॉजी, सप्टेंबर 2010. वेब 18 फेब्रुवारी 2017
2 सेंगर, एफ, एस. निक्क्लेन आणि ए. आर. कॉलसन. "चेन-टर्मिनेटिंग इनहिबिटरससह डीएनए सिंकिंगिंग. "प्रोसेसिंग्स ऑफ नेशनल एकेडमी ऑफ सायन्सेस 74. 12 (1 9 77): 5463-467. वेब
3 लिऊ, लिन, यिनहु ली, सिलीआंग ली, नी हू, यिमिन हे, रे पोंग, दन्नी लिन, लिहुआ लू आणि मॅगी लॉ. "पुढील-निर्मिती क्रमवार प्रणालींची तुलना "जर्नल ऑफ बायोमेडिसिन आणि बायोटेक्नॉलॉजी 2012 (2012): 1-11. वेब प्रतिमा सौजन्याने:
"सॅन्जर-सिकेंजिंग" एस्टेवेजद्वारे - स्वत: चे काम (सीसी बाय-एसए 3. 0) कॉमन्सद्वारे विकिमीडिया
पुढच्या पिढीच्या क्रमवारीत विकास "नेदरब्रगट, लेक्स (2012) - (CC BY 3. 0) कॉमन्स द्वारे विकिमीडिया