जीन क्लोनिंग आणि पीसीआर दरम्यान फरक
महत्त्वाचा फरक - जीएन क्लोनिंग वि पीएसआर विशिष्ट डीएनए फ्रॅम्पमपासून डीएनएच्या बर्याच प्रतींचे संश्लेषण म्हणून डीएनए प्रवर्धन म्हणतात. दोन मुख्य डीएनए प्रवर्धन प्रक्रिया म्हणजे जीन क्लोनिंग आणि पीसीआर. जीन क्लोनिंग आणि पीसीआर यामधील मुख्य फरक आहे,
जीन क्लोनिंग एका विशिष्ट जीनच्या अनेक प्रती बनविते विवोमध्ये पुनः संयोजक डीएनए तयार करून आणि होस्टच्या जीवाणूच्या आत वाढत असताना, पीसीआरची लक्षावधी प्रती विशिष्ट डीएनए खंड इन विट्रो मध्ये विकृती आणि संश्लेषणाच्या पुनरावृत्तीच्या चक्रांनंतर. अनुक्रमणिका 1. विहंगावलोकन आणि महत्त्वाचे अंतर
2 जीन क्लोनिंग 3 पीसीआर काय आहे 4 साइड बायपास बाय बाय - क्लोनिंग वि पीसीआर5 सारांश
जीन क्लोनिंग म्हणजे काय?
जीन क्लोनिंग रीकॉम्बीनंट डीएनएच्या बांधणीच्या माध्यमातून एखाद्या जीवकाचा जीनोमिक डीएनएमधून विशिष्ट जनुक शोधून काढण्यास आणि विकसित करण्यासाठी एक तंत्र आहे. जीनोमिक डीएनएमध्ये हजारो वेगवेगळ्या जनुकांची प्रथिने आहेत. जेव्हा डीएनए काढला जातो तेव्हा त्यात सर्व शक्य जीन्सचा समावेश होतो. जीन क्लोनिंग तंत्राने डीएनएच्या विशिष्ट जीनचा शोध लावला आहे. म्हणूनच जीन क्लोनिंग आण्विक जीवशास्त्र यातील एक महत्वपूर्ण साधन म्हणून कार्य करते.
डीएनएमधील संबंधित जीनच्या स्थानाबद्दल काहीही संकेत नसल्यास एखाद्या जीवसृष्टीत एक जीनोमिक लायब्ररीची निर्मिती जीन क्लोनिंगमध्ये आवश्यक आहे. एक जीनोमिक लायब्ररी खालील चरण वापरून केले जाते.
पायरी 1:
जीवसृष्टीपासून एकूण डीएनए काढणे ज्यामध्ये आवश्यक आनुवंशिकता
पायरी 2: लहान आटोपशीर तुकड्यांना तयार करण्यासाठी काढलेल्या डीएनएच्या प्रतिबंधक पचन. या पायरीला प्रतिबंधक एंडोन्यूक्लूससद्वारे मदत केली जाते.
पायरी 3:
एक योग्य वेक्टर निवडणे आणि त्याच निर्बंध अंतोन्यूकेस वापरून व्हेक्टर डीएनए उघडणे. बॅक्टेरियाचे प्लाझमीड सामान्यतः विदेशी डि.एन.ए. वाहण्यासाठी वैक्टर म्हणून वापरले जातात. प्लॅमिड हे जिवाणूंच्या आत असलेल्या डीएनएच्या लहान मंडळे आहेत. पायरी 4:
पुनः संयोजक डीएनए रेणू तयार करण्यासाठी सदिश डीएनए आणि विघटनयुक्त डीएनए एकत्रित करणे. ही पायरी डीएनए लिगेस द्वारे संचालित आहे. पायरी 5: पुन्हा जीवाणू डीएनए अणूंचे होस्ट जीवाणूंमध्ये हस्तांतरित करणे. हे पाऊल परिवर्तन म्हणून ओळखले जाते, आणि उष्णतेची धक्का वापरून केले जाते.
पायरी 5:संस्कृती माध्यमात रूपांतरित जीवाणू पेशींची स्क्रीनिंग. रूपांतरित आणि नॉटट्रान्सफॉर्म केलेले होस्ट सेलची एक मिश्रित लोकसंख्या रूपांतरण प्रक्रियेच्या शेवटी प्राप्त केली जाते. रूचीच्या जीनमध्ये केवळ रूपांतरित होस्ट सेलमध्येच समाविष्ट आहे.म्हणून, रूपांतरित पेशी निवडणे आवश्यक आहे. सिलेक्शन मिडिया वापरून निवड केली जाते ज्यात प्रतिजैविक असतात. केवळ निवडलेल्या पेशी या स्क्रिनींग माध्यमात वाढतात जेणेकरून निवड सक्षम होते. पायरी 6:
जिवाणू ग्रंथालय तयार करण्यासाठी जीवाणू वाढणे. या चरणात, बदललेले होस्ट सेल ताजे संस्कृती मिडियामध्ये सादर केले आहेत जे इष्टतम वाढ आवश्यकता पुरवतात. सांस्कृतिक भाषेतील एकूण वसाहती ही जीवच्या जीनोमिक लायब्ररीचे प्रतिनिधित्व करते. पायरी 7:
पुनर्जीवनकारक डीएनए रेणू ज्यामध्ये व्यायांचे जननियोजन आहे ते पुनःसंयोजक डीएनएच्या हजारो क्लोन केलेल्या तुकड्यांमधून तपासले जाणे आवश्यक आहे. हे विशिष्ट जनुका किंवा त्या जनुकांपासून विशिष्ट प्रथिने परिणाम दर्शविणार्या, तपासणीचा उपयोग करून पूर्ण केले जाऊ शकते. एकदा जेव्हा सूक्ष्म जिवामध्ये संपूर्ण वसाहतींपासून जिवाणू कॉलनीची ओळख पटली आहे, तेव्हा जीन समाविष्ट असलेल्या रीकॉम्बनिन प्लाझिडच्या लाखो प्रती बनवणे शक्य आहे.
जीन क्लोनिंगचा उपयोग जीन वाचनालये स्थापन करण्यास, विशेष प्रथिने, जीवनसत्त्वे, प्रतिजैविक, हार्मोन्स, क्रमवारित आणि जीवसृष्टीचे मॅपिंग जीनोम बनविण्यासाठी केला जातो. फॉरेन्सिक इ. मध्ये डीएनएच्या अनेक प्रती बनविणे. चित्रा_1: जीन क्लोनिंग पीसीआर म्हणजे काय?
पॉलिमरेझ चेन रिऍक्शन (पीसीआर) एक अशी तंत्र आहे जी एका विशिष्ट डीएनए तुकड्यांची मोठी संख्या बनवते. विशिष्ट डीएनए क्रमांची झपाटयाने वाढ, पीसीआरद्वारा इन विट्रो परिस्थितीनुसार प्राप्त केली जाते. हे तंत्र आण्विक जीवशास्त्र मध्ये एक अतिशय शक्तिशाली साधन आहे कारण ते डीएनएच्या एका लहान नमुन्याला वापरण्यायोग्य रकमेमध्ये गुणाकार करू शकते. 1 9 83 मध्ये कॅरि मुल्लिस यांनी पीसीआरची सुरूवात केली आणि या पुरस्कार-विजेत्या आविष्काराने आण्विक जीवशास्त्र मध्ये एक प्रचंड प्रगती केली.
पीसीआर तंत्राने पीसीआरच्या पुनरावृत्त्या वारंवार दिसतात जसे चित्रा 02 मध्ये दर्शविले आहे. एक पीसीआर प्रतिक्रिया तीन वेगवेगळ्या तापमानांवर होणारी तीन मुख्य पायरी असते; 9 4 9 99 99 0 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 99 म्हणून, जेव्हा पीसीआर सुरू होते, तेव्हा उचित प्रतिकृतीसाठी तापमान चढउतार अत्यंत राखले जावे. पीसीआर पीसीआर ट्यूबच्या आत पीसीआर मशीनमध्ये केले जाते. पीसीआर टय़ूब टेम्पलेट डीएनए, टॅक पोलाइमेरास, प्राइमर्स, डीएनटीपी आणि बफर यासह योग्य पीसीआर मिश्रणासह लोड केले जातात. दुहेरी फंक्शनल नमुना डीएनएला सिंगल फंक्शनल डीएनएमध्ये 9 4 9-99 0 सी वर पूरक पायांमधील हाइड्रोजन बंध तोडण्याद्वारे केले जाते. मग टेम्पलेट डीएनएचे एकमेव भाग प्राइमर्ससाठी उघडकीस आल्या आहेत. प्राइमर्स एक जोडी (अग्रेषित व उलट) प्रदान केले पाहिजे, आणि ते उच्च तापमानात सहन करण्यास थर्मास्टाबल असावे. प्राइमर्स हे एकमेव अडकलेले लहान डीएनए अनुक्रम ज्याचे लक्ष्य डीएनए टप्प्यापर्यंत पोहोचतात. पीसीआरमध्ये सिंथेटिक प्राइमर्स वापरतात. प्राइमर्स नमुना डीएनएच्या पूरक पायांशी बांधून घेतात आणि नवीन नदीचे संश्लेषण सुरू करतात. या पायरीने टीक पॉलीमॅरेझ नावाचे सजीवांच्या शरीरातून आलेले उत्स्फुर्त प्रयोग केले जातात; एक थर्मोस्टेबल डीएनए पोलिमॅरेझ एंजाइम थर्मस एककॅटिकस
पासून वेगळे आहे. प्राइमर्स आणि न्यूक्लियोटाइड (इमारत ब्लॉक्स्) उपलब्ध असताना, Taq polymerase डीएनए टेम्प्लेट करण्यासाठी डीएनए पूरक नवीन भागाची रचना करतो.पीसीआर कार्यक्रमाच्या शेवटी, जेल इथॉप्रोहिरोशनी वापरून प्रदीप्त डीएनए खंड पहाता येतो. पुढील विश्लेषण आवश्यक असल्यास, पीसीआर उत्पादन जेल पासून शुध्द आहे.
अनुवांशिक आणि प्राप्त केलेल्या रोगांचे निदान आणि परीक्षण, गुन्हेगारांची ओळख (फोरेंसिकच्या क्षेत्रातील), डीएनएच्या लक्ष्यित विभागातील संरचना आणि कार्य अभ्यास, अनुक्रमित आणि जीवांच्या जीनोमांचे मॅपिंग इत्यादि साठी पीसीआर उपयुक्त आहे. वैद्यकीय आणि आण्विक जीवशास्त्र संशोधन प्रयोगशाळा मध्ये एक पीसीआर नियमित प्रयोगशाळा तंत्र बनले आहे कारण त्यामध्ये विविध प्रकारचे अनुप्रयोग आहेत.
Figure_2: पॉलिमरेझ चेन रिएक्शन
जीन क्लोनिंग आणि पीसीआरमध्ये काय फरक आहे?
- फरक कलम आधी मध्यम -> जीसीन क्लोनिंग वि पीसीआर जीन क्लोनिंग विशिष्ट जीनच्या अनेक प्रती बनविण्याची प्रक्रिया आहे जी
जिवंत डीएनएद्वारे आणि एक होस्ट जीवाणू.
पीसीआर तंत्रज्ञानाद्वारे पीसीआर प्रतिक्रिया पुनरावृत्तीच्या चक्रांद्वारे एक विशिष्ट डीएनए क्रम इन विट्रो ची एकापेक्षा जास्त प्रती बनविते. रेकोम्बीनंट डि.एन.ए. चे बांधकाम करण्याची आवश्यकता जीन शोधण्याकरता पुनः संयोजक डीएनए तयार केले जाते. रेकोबिनंट डीएनए तयार केले जात नाही. श्रमांची गरज ही प्रक्रिया कामगारांची गहन आहे. सधन श्रम आवश्यक नाही जिवंत किंवा इन विट्रो प्रक्रियेमध्ये पुनः संयोजक डीएनएचे बांधकाम इन विट्रो मध्ये आणि डीएनएचे प्रवर्धन आहे विवो मध्ये डीएनएचे प्रवर्धन पूर्णपणे
इन विट्रोमध्ये
सारांश - जीएन क्लोनिंग वि पीसीआर डीएनए प्रवर्धनसाठी जीन क्लोनिंग आणि पीसीआर ही दोन पद्धती आहेत. पीसीआर हा एक
