संगेर Sequencing आणि Pyrosequencing फरक | संगेर sequencing Pyrosequencing वि

की फरक - संगेर sequencing Pyrosequencing

वि डीएनए मालिका ज्ञान पासून डीएनए विश्लेषण अतिशय महत्त्वाचे आहे एका विशिष्ट डीएनए विभागाच्या योग्य न्यूक्लियोटाइड व्यवस्थेबद्दल याविषयी बर्याच महत्त्वाची माहिती दिली आहे. वेगवेगळ्या डीएनए संक्रमणाची पद्धती आहेत. आणीर बायोलॉजी मध्ये मोठ्या प्रमाणात वापरल्या जाणार्या दोन भिन्न डीएनए सिंकिंग पद्धती Sanger sequencing आणि Pyrosequencing आहेत. संगेर sequencing आणि Pyrosequencing दरम्यान की फरक संगेर मालिका pyrosequencing नेमका आदेश वाचण्यासाठी nucleotides अंतर्भूत आणि पूरक क्रम संश्लेषण करून pyrophosphate प्रकाशन ओळखतो, तर nucleotide क्रम वाचा डीएनए संश्लेषण बंद करण्याचा dideoxynucleotides चा वापर करतो क्रम

अनुक्रमणिका

1. विहंगावलोकन आणि महत्त्वाचे अंतर

2 सॅन्गरेर सेक्शनिंग 3 पुरोसेक्झेन्सिंग 4 साइड तुलना करून साइड - पिअर सक्वेन्सींग vs सेंजर सीक्वेन्सिंग

5 सारांश सॅन्गरे सेक्शनिंग म्हणजे काय?

संगेर मालिका 1977 मध्ये फ्रेडरिक संगेर आणि त्याच्या महाविद्यालये विकसित एक पहिली पिढी डीएनए मालिका पद्धत हे देखील माहित आहे

साखळी खंडित sequencing

किंवा

Dideoxy मालिका हे आधारित आहे पासून डायडोऑक्सिनक्लियोटाईडस् (डीडीएनएनटीपी) द्वारे साखळी बंद. नवीन पिढीतील (एनजीएस) विकसित होईपर्यंत ही पद्धत 30 वर्षांपेक्षा जास्त काळ वापरली जात होती. सेंगर सिकेंजिंग तंत्राने अचूक न्युक्लिओटाईड ऑर्डर किंवा डीएनए फ्रॅगमेंटच्या जोडणीचा शोध सक्षम केला. हे डीडीएनएनटीपीच्या निवडक निगमन आधारित आणि इन विट्रो डीएनए प्रतिकृती दरम्यान डीएनए संश्लेषण थांबविण्यावर आधारित आहे. 3 'ओएच समूहांच्या अनुपस्थितीत समीप न्युक्लियोटाइडमध्ये फॉस्फोडिएस्टर बॉण्ड निर्मिती चालू ठेवण्यासाठी डीडीएनएनटीपीजचा एक खास वैशिष्ट्य आहे. म्हणूनच, एकदा डीडीएनटीपी संलग्न केला आहे, तेव्हा चैन बंधार्यास बंद होते आणि त्या मुदतीपासून बंद होते. चार डीडीएनटीपी - डीडीएटीपी, डीडीसीटीपी, डीडीजीटीपी आणि डीडीटीटीपी - सॅन्गॅर अनुक्रमणिकेत वापरलेले आहेत. हे न्यूक्लियोटाइड डीएनए रेप्लोजन प्रक्रिया थांबवतात तेव्हा ते डीएनएच्या वाढत्या लहरींमध्ये सामील होतात आणि परिणामी लहान डीएनएची लांबी कमी होते. केशिलरी जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसचा वापर आकृती 01 मध्ये दाखविल्याप्रमाणे या लहान डीएनए किडांना त्यांच्या आकाराने एका जेलवर आयोजित करण्यासाठी केला जातो.

आकृती 1: संश्लेषित केलेल्या लहान डीएनएचे केशिलरी जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसिस कारण इन विट्रो डीएनएची प्रतिकृती, काही आवश्यकता पुरविल्या पाहिजेत. ते डीएनए पोलिमारेझ एंझाइम, टेम्पलेट डीएनए, ऑलिगॉनक्लियक्टिड प्राइमर्स, आणि डॉक्सिन्यूक्लियोक्लाइड (डीएनटीपी) आहेत. सेंगर सिकेंजिंगमध्ये, डीएनए प्रतिकृती चार वेगवेगळ्या टेस्ट ट्यूबांमध्ये आणि 4 प्रकारचे डीडीएनएनटीपी वेगवेगळे करण्यात येते. Deoxynucleotides संबंधित ddNTPs द्वारे पूर्णपणे बदलले नाहीत. विशिष्ट डीएनटीपी (उदाहरणार्थ; डीएटीपी + डीडीएटीपी) चे मिश्रण ट्यूबमध्ये समाविष्ट केले आहे आणि त्याची पुनरावृत्ती केली आहे. चार स्वतंत्र विहिरी असलेल्या एका जेलवर चार वेगवेगळ्या ट्यूब उत्पादने चालतात. मग जेल वाचून, चित्रा 2 मध्ये दाखवल्याप्रमाणे क्रम तयार केला जाऊ शकतो.

आकृती 02: सेंन्सर श्रृंखलेने सेंगर सिकेंजिंग हा एक महत्त्वाचा तंत्र आहे जो आण्विक जीवशास्त्र या अनेक भागात मदत करतो. सेंन्जर सिकेंजिंग-आधारित पद्धतींच्या मदतीने मानव जीनोम प्रोजेक्ट यशस्वीपणे पूर्ण करण्यात आला. Sanger sequencing हे लक्ष्य डीएनए सिकेंजिंग, कॅन्सर आणि आनुवंशिक रोग संशोधन, जनन अभिव्यक्ती विश्लेषण, मानवी ओळख, रोगसूक्ष्म तपासणी, सूक्ष्मजीव अनुक्रम इत्यादीसाठी उपयुक्त आहे.

सॅन्गरे सिकेंजिंगचे अनेक नुकसान आहेत: डीएनएचे प्रमाण क्रमबद्ध 1000 आधार जोड्यांपेक्षा जास्त असू शकत नाही एका वेळी फक्त एकाच कटकटी अनुक्रमित केली जाऊ शकते. प्रक्रिया वेळ घेणारे आणि महाग आहे.

म्हणून, या समस्यांवर मात करण्यासाठी वेळोवेळी नवीन प्रगत क्रमवारणे तंत्र विकसित केले गेले. तथापि, सुमारे 850 बेस जोडी लांबीच्या तुकड्यांना त्याच्या अचूक परिणामांमुळे Sanger sequencing अजूनही वापरात आहे.

प्योरौसेनिंग म्हणजे काय?

पीरोसेक्नेसिंग हा "सेक्झेन्सिंग बाय संश्लेषण" आधारित एक कादंबरीकार डीएनए क्रमवारत तंत्र आहे. न्यूक्लिओटाईड इनकॉर्पोरेशनवर पिओरोफोस्फेट प्रकाशीत केल्यावर हे तंत्र अवलंबून असते. या प्रक्रियेला चार वेगवेगळ्या एन्झाइम असतात: डीएनए पॉलिमर्स, एटीपी सल्फ़्युरीलझ, ल्युइफेरेझ आणि एपिअरझ आणि दोन सबस्ट्रेट्स एडेनोसिन 5 'फॉस्फोसल्फेट (एपीएस) आणि ल्यूइफेरिन.

ही प्रक्रिया एकल-अडकलेल्या डीएनए टेम्प्लेटसह प्राइमर बंधनापासून सुरू होते आणि डीएनए पोलिमारेझ त्याच्याशी पूरक असलेल्या न्यूक्लियोटिडसचा आरंभ करणे सुरू करते. जेव्हा न्यूक्लियोटिडस् एकत्र येतात (न्यूक्लियइक एसिड पॉलीमरायझेशन), तेव्हा तो पीरोफोस्फेट (गटबद्ध दोन फॉस्फेट गट) रिलीज करतो गट आणि ऊर्जा. प्रत्येक न्युक्लिओटाईड ऍसिडिएशन पिओरोफोस्फेटचा समिवोलर डायजेस प्रकाशीत करतो. एआयटीपी सल्फ़रीलझ द्वारे पीओ्रोफोसेट एटीपीमध्ये सब्सट्रेट एपीएसची उपस्थिती आहे. व्युत्पन्न एटीपी ल्युइफेरेझ-मध्यस्थ रूपांतरण म्हणजे ऑक्सिलेफिफिरिनमध्ये ल्युइफेरिनचे रुपांतर करतो, एटीपीच्या प्रमाणाप्रमाणे प्रमाणित प्रकाशमान प्रमाणात उत्पन्न करतात. फोटोन डिटेक्शन डिव्हाइसद्वारे किंवा फोटोमल्टिप्लेअरद्वारे प्रकाश ओळखला जातो आणि एक पॅरोग्रॅम तयार करतो. प्रतिक्रिया मिश्रण मध्ये एटीपी आणि गैर-समावेशित dNTPs कमी होणे Apyrase. डीएनटीपी व्यतिरिक्त एकावेळी एकदा केले जाते. न्यूक्लियोटाइडच्या समावेशामुळे प्रकाशाची स्थापना आणि तपासणीनुसार ओळखले जाते, टेम्पलेटचा क्रम निश्चित केला जाऊ शकतो.चित्रा 03 मध्ये दर्शविल्या प्रमाणे नमूना डीएनएच्या न्यूक्लिओटाईड अनुक्रम निर्मितीसाठी प्योरोग्रामचा वापर केला जातो.

• डीयूएच्या लघु भागांच्या एका न्यूक्लियोटाइड पॉलिमॉर्फिज्म विश्लेषणात आणि सिक्वन्सिंगमध्ये Pyrosequencing हे फार महत्वाचे आहे. उच्च अचूकता, लवचिकता, ऑटोमेशन सहजतेने आणि समांतर प्रक्रिया करणे हे Sanger sequencing techniques वरून pyrosequencing चे फायदे आहेत.
• आकृती 03: पुरोसेक्सेनिंग सॅन्गर सीक्जेन्सिंग आणि पीरोसेक्नेसिंगमध्ये काय फरक आहे?
• - फरक लेख मध्यम पूर्वी -> पियरोक्वेन्सिंग विरुद्ध सॅन्गर सीक्जेन्सिंग

सॅन्गर सिकेंजिंग डीएनएनए पोलिमॅरेझ आणि चेन टर्मिनेशन द्वारे डीडीएनटीपीचे निवडक निगमन आधारित डीएनए सिंकिंगिंग पद्धत आहे.

पॉयॉसेक्नेसिंग हा डीएनए सिक्वेन्सिंग मेथड आहे जो न्यूक्लियोटाइडच्या समावेशासहित पीरोफोस्फेट प्रकाशीत तपासणीवर आधारित आहे.

डीडीएनटीपी डीडीएनएनपीपीचा वापर डीएनए प्रतिकृती संपुर्ण करण्यासाठी केला जातो

डीडीएनएनटीपी वापरला नाही.

अंतर्भावित एन्झाइमस् डीएनए पोलिमॅरेझचा वापर केला जातो.

चार एनझाइमचा वापर केला जातो: डीएनए पोलिमॅरेझ, एटीपी सल्फ़्युरीलझ, ल्युसिफेरेझ आणि एपिरस.

वापरलेल्या थरांना

एपीएस आणि ल्युसिफरिन वापरले नाही.

अॅडेनोसिन 5 'फॉस्फोसल्फेट (एपीएस) आणि ल्यूइफीरिनचा वापर केला जातो.
कमाल तापमान	ही एक धीमे प्रक्रिया आहे
ही जलद प्रक्रिया आहे
सारांश - सिनर सीक्वेन्सिंग वि पायरोसेक्नेसिंग सेंगर सिकेंजिंग आणि पीरोसेक्नेसिंग हे दोन आण्विक जीवशास्त्र मध्ये वापरले जाणारे दोन डीएनए सिसेसिंग पद्धती आहेत. सॅन्गरेर सिक्वंसीजिंगमुळे साखळीत विस्तार वाढवून क्रमशः न्युक्लिओटाइड्सचा क्रम तयार होतो, तर पीयरोसेन्सिंगने न्यूक्लियोटाइड्सचा समावेश करून आणि पीरोफोस्फेट्सची प्राप्ति शोधून क्रमशः न्युक्लियोटाइड्सचे अचूक क्रम तयार करतो. म्हणून, सेंगर सिक्वेंसिजिंग आणि पीरोसेक्नेसिंगमधील मुख्य फरक असे आहे की सेंन्झेर सिनेकिंगिंग चेन टर्मिनेशनद्वारे क्रमवारित काम करते आणि पॅरीसक्वेनिंगिंग सॅन्सीसिसद्वारे क्रमवार काम करते.	संदर्भ: 1 फकरुद्दीन, एमडी, आणि अभिजीत चौधरी. "पीरोसेक्नेसिंग-पारंपरिक सोनांट सीनियरिंग टू वैकल्पिक" "बायोकेमेस्ट्री अॅण्ड बायोटेक्नॉलॉजीचे अमेरिकन जर्नल. विज्ञान प्रकाशने, 02 मार्च 2012. वेब 28 फेब्रुवारी 2017.
2 "सेंन्जर क्रमश: "सेंगर सिकेंजिंग - सायन्सडिरेक्ट विषय. एन. पी., n डी वेब 28 फेब्रु. 2017
प्रतिमा सौजन्याने:	1 क्रिस्तोफ गोमेन्स (मॉडिफिझीर्ट) - "डॉडोसोई-मेथोडे" - डॉ. नॉर्मन मॉडर, औफ बेसिस ईनेर डेटि वनी क्रिस्तोफ गोमेन्स (सीसी बाय-एसए 3. 0) कॉमन्सद्वारे विकिमीडिया
2 कॉमन्सद्वारे पोलिश भाषा विकिपीडिया (सीसी बाय-एसए 3. 0) येथे एनझो द्वारा "सेंगर-डीएनए-सीक" विकिमीडिया 3 मायक्रोबायोलॉजीबाइट्स द्वारा "पीरोसेक्नेसिंग" (सीसी बाय-एसए 2. 0) फ्लिकर मार्गे शिफारस डंप आणि लँडफिल दरम्यान फरक अल नीनो आणि ला नीना यांच्यातील फरक इमू आणि शहामृग दरम्यान फरक